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吸附柱色谱法分离精制中药对照品

发布日期:2011-12-25 
吸附柱色谱法
   
柱层析法是分离精制化合物的常用方法.主要有吸附柱层析、分配柱层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等。
    由于中药有效成分类型不同.性质各异,所以选择层析条件是不同的。
    (一)吸附柱色谱法
    吸附柱层析法是将粗提物样品加在装有吸附剂(氧化铝、硅胶、聚酰胺等)的长玻璃柱中,再加适当的溶剂冲洗,由于吸附剂对各组分吸附能力不同而在柱中向下移动速度不同,吸附能力最弱的组分随溶剂首先流出,通过分段定盘收集洗脱液而使各组分得到分离的方法。

吸附柱色谱详细介绍:

色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装入吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果。除另有规定外,通常多采用直径为0.07~0.15mm的颗粒。色谱柱的大小,吸附剂的品种和用量,以及洗脱时的流速,均按各品种项下的规定。
(1) 吸附剂的填装 ①干法 将吸附剂一次加入色谱柱,振动管壁使其均匀下沉,然后沿管壁缓缓加入洗脱剂;或在色谱柱下端出口处连接活塞,加入适量的洗脱剂,旋开活塞使洗脱剂缓缓滴出,然后自管顶缓缓加入吸附剂,使其均匀地润湿下沉,在管内形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。
②湿法 将吸附剂与洗脱剂混合,搅拌除去空气泡,徐徐倾入色谱柱中,然后加入洗脱剂将附着管壁的吸附剂洗下,使色谱柱面平整。俟填装吸附剂所用洗脱剂从色谱柱自然流下,液面和柱表面相平时,即加供试品溶液。
(2) 供试品的加入 除另有规定外,将供试品溶于开始洗脱时使用的洗脱剂中,再沿色谱管壁缓缓加入,注意勿使吸附剂翻起。或将供试品溶于适当的溶剂中,与少量吸附剂混匀,再使溶剂挥发去尽使呈松散状,加在已制备好的色谱柱上面。如供试品在常用溶剂中不溶,可将供试品与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。
(3)洗脱 除另有规定外,通常按洗脱剂洗脱能力大小递增变换洗脱剂的品种和比例,分别分部收集流出液,至流出液中所含成分显著减少或不再含有时,再改变洗脱剂的品种和比例。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。
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